PI染色法检测肿瘤细胞周期攻略

1、离心并收集细胞，弃上清，用预冷的PBS清洗细胞两次。

2、加入70%乙醇，于4℃固定过夜，或-20℃保存（一般来讲1个月内都是没有问题的）。

3、离心收及细胞，以1mL的PBS清洗一次，加入500uLPBS（含50ug/mL的PI），100ug/mL RNase A，0.2% Triton X-100）。

4、��避光孵育30min。

5、用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个。

6、用细胞周期拟合ModFit软件分析

1、分析时，使用FL2-W和FL2-A显示，去除联体细胞。

2、变异系数（CV）越小，峰形越好，越尖锐，能控制在5%左右最好，一般小于10%就可以了。

3、一般用400目筛网将黏在一起的细胞团滤掉，否则可能出现人为的多倍体干扰。

4、RNAse降解RNA，这样才能以荧光强度反映DNA的含量。