活体成像实验中荧光素D-luciferin，钾盐的制备

1、体外生物发光试验荧光素试剂的制备

材料

—D-荧光素，钾盐（D-luciferin，potassium salt ，sciencelight luc001）

—无菌水

—完全培养基

步骤

1. 用无菌水制备200X荧光素原液（30mg/ml），轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。

*提示：可以用33.3 mL蒸馏水溶解1.0 g D-荧光素钠盐，配制成100 mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。也可以按实验需要量进行配置。

2. 将D-luciferin，potassium salt 溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150 μg/ml的工作液。用组织培养基1∶200稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)。

3. 去除培养细胞的培养基。

4. 图像分析前，向细胞培养板中添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。

—注射器滤膜过滤除菌，0.2 μ m

*提示：成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。

2、体内生物发光试验荧光素试剂的制备

材料

—D-荧光素，钾盐（D-luciferin，potassium salt ，sciencelight luc001）

—无菌PBS，w/o Mg2+、Ca2+

—注射器滤膜过滤除菌，0.2 μ m

步骤

用无菌PBS配制D-荧光素钾盐工作液(15mg/mL)，0.2 um滤膜过滤除菌。

按10 uL/g剂量，给予150mg/kg荧光素工作液。（例如，10g的小鼠注射100 μl工作液，被给予1.5mg荧光素。）

腹腔注射荧光素10-15 min后进行成像分析。

*需要对每个动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间。