如何做出一张好的免疫荧光片子（很详细）

1、    首先油笔画圈，再利用4%PFA溶液固定切片20min，注意4%PFA要用PBS配制，否则容易引起细胞肿胀，免疫荧光最好的效果不好，固定完，1*PBS洗3次。

2、    0.4%tritonx-100，通透10min，室温，然后1*PBS洗3次。

3、     3%BSA对每个标本封闭1h，室温。

4、     封闭过后，不必洗，而是要把多余的BSA吸走，一抗孵育4度过夜，我用的是抗opsin抗体。

5、    第二天1*PBS洗3次，洗去未结合的一抗，然后孵育二抗，室温40分钟，注意你的二抗是488还是594的，因为不同的激发光的颜色是不一样的，我用的594发红光。

6、   二抗孵育完毕，1*PBS洗3次洗去未结合的二抗，滴加DAPI用干净的盖玻片封片    

7、    荧光显微镜观察。

8、  让大家看看我用rhodopsin做的图片哦