超敏ECL化学发光检测试剂盒检测抗原的方法

1、将印迹膜置于封闭液中，室温轻轻震荡20-60min，以封闭掉非特异性位点。

2、弃去封闭液，加入适量的一抗溶液，于摇床上轻轻震荡1h。（也可将印迹膜与一抗在2-8°C条件下孵育过夜。）

3、将印迹膜于洗脱液中悬浮清洗5min以上，并更换洗脱液4-6次。

4、将印迹膜与适量的HRP-结合物置于摇床上轻轻震荡，室温孵育1h。

5、重复步骤3以去除未结合的HRP-结合物

6、将A液和B液以1：1混合即得到超敏ECL化学发光工作液，推荐使用量为0.1mL/cm2。

7、将工作液与印迹膜于室温孵育5min。

8、将膜从工作液中取出，并用吸水纸吸去多余的液体，置于两层干净的保鲜膜之间，小心挤出印迹膜与保鲜膜之间的气泡。

9、将印迹膜置于暗盒中，蛋白面朝上，于暗室中进行X-光胶片曝光。

10、建议首次曝光时间为60s，进而通过调整曝光时间获得较好的实验结果。

1、ECL底物——增强型化学发光底物能检测抗体以及Western blot或ELISA标签中的HRP活性。

经济性——与同类化学发光底物相比花费更少。

pg级灵敏性——高灵敏性能快速检测更广泛的蛋白范围。

信号稳定——发光时间长，能进行多次曝光

信号强——发光信号比普通的以鲁米诺为基础的HRP检测体系强两倍以上

工作液稳定性高——工作液室温稳定存放8小时；试剂盒能在室温下保存一年。

节约抗体——需要更少（稀释更多）的一抗和二抗

校正曲线范围广——校正曲线的范围从4.00–8000pg，R2为0.992。