HPLC色谱柱故障排除

1、柱压高多少正常？

同一条件：新色谱柱，C18，5µm，球形，4.6×250mm，100%甲醇，1mL/min，25℃，管路内径0.3mm（0.010″），通常:＜7MPa。

如果柱压高了，先确认出压力升高的组件，有可能是色谱柱也可能是其他组件的原因。色谱柱污染、填料堵塞、筛板堵塞都会造成压力升高。

2、确定压力升高来源？

保护柱-卸下保护柱，仪器堵塞-卸下色谱柱，色谱柱进口端堵塞-反方向测试（不是反冲！！）如果是色谱柱引起的柱压升高，问题是……

3、冲洗色谱柱

反相色谱柱（C18,C8）

按照以下方式冲洗：

a、 水/乙腈95/5→0/100 

b、如下图（蓝色）

如果不行，可在异丙醇里加1%TFA.

使用己烷或二氯甲烷冲洗色谱柱，在重新使用反相流动相以前，必须用异丙醇过渡！正相色谱柱（SiO2.Diol），以下溶剂至少各50ml冲洗色谱柱:（紫色）

原则：使用比MP更强的溶剂冲洗二氯甲烷>丙醇>四氢呋喃>乙醇>乙腈>甲醇>水。那么冲洗色谱柱  一定正确吗？

C18柱上蛋白的冲洗：  是DMSO而不是THF！！

C18柱上淀粉的冲洗：  是水而不是甲醇！！

根据强保留污染物性质，选择合适的冲洗溶剂和程序！！

4、冲洗筛板

强溶剂、反方向、低流速。

反相色谱柱：水/乙腈95/5→0/100

正相色谱柱：

50%甲醇＋50%三氯甲烷→ 100%乙酸乙酯

－冲洗筛板不要连接检测器

－不建议用户自行更换筛板

5、冲洗筛板

强溶剂、反方向、低流速。

反相色谱柱：水/乙腈95/5→0/100

正相色谱柱：

50%甲醇＋50%三氯甲烷→ 100%乙酸乙酯

－冲洗筛板不要连接检测器

－不建议用户自行更换筛板

6、样品基质如何去除 ？

制剂：淀粉、硅胶、其他添加剂

中药：强疏水性成分